10XVisium空间转录组实验揭秘细胞空间分布与功能关联(空间转录组测序流程)
随着生物技术的发展,空间转录组学逐渐成为研究细胞在组织中的空间分布及其与功能关联的重要手段。10X Genomics的Visium空间转录组实验技术,以其独特的单细胞解析能力,为研究者提供了深入了解细胞空间信息的强大工具。以下是关于10X Visium空间转录组实验的详细介绍。
一、10X Visium技术原理
10X Visium技术基于原位测序原理,通过微流体技术将组织切片上的细胞进行定位,并使用空间分辨的RNA测序技术对每个细胞进行转录组测序。这样,研究者可以同时获得细胞的空间位置信息和基因表达信息,从而揭示细胞在组织中的空间分布及其与功能的关系。
二、10X Visium实验流程
1. 样本准备:将待研究组织切片固定,并进行适当处理,如脱钙、脱脂等,以利于后续实验。
2. Visium微流体芯片制备:将处理好的组织切片与Visium微流体芯片结合,通过微流体技术将细胞定位到芯片上的特定位置。
3. 核酸提取与反转录:从芯片上提取细胞内的RNA,并进行反转录合成cDNA。
4. 探针设计与合成:根据目标基因的序列,设计并合成特异性探针。
5. 探针杂交与洗涤:将合成的探针与cDNA进行杂交,洗涤去除未杂交的探针。
6. 测序与数据分析:将杂交后的样本进行高通量测序,并使用相应的生物信息学软件对数据进行处理和分析。
三、10X Visium实验优势
1. 高空间分辨率:Visium技术可以将细胞定位到芯片上的特定位置,实现亚细胞尺度的空间分辨。
2. 大规模单细胞解析:Visium技术可以同时解析大量细胞,提高实验效率。
3. 与其他技术兼容:Visium实验结果可以与其他分子生物学技术,如免疫组化、免疫荧光等相结合,进行多模态分析。
4. 数据分析便捷:Visium实验数据可以通过10X Genomics提供的生物信息学软件进行便捷的分析。
四、应用领域
10X Visium空间转录组实验在以下领域具有广泛应用:
1. 组织发育与器官形成研究:揭示细胞在组织发育过程中的空间分布和功能调控。
2. 疾病发生与进展研究:了解肿瘤、炎症等疾病中细胞的空间分布和功能变化。
3. 药物研发:筛选药物靶点,研究药物在体内的分布和作用机制。
10X Visium空间转录组实验技术为研究者提供了一个强大的工具,有助于深入理解细胞在组织中的空间分布与功能关联。随着该技术的不断发展,其在生物学和医学领域的应用前景将更加广阔。