常见问题
1.怎样推荐检测数据量?
建议10,000条 sgRNA 测1Gb 的数据量
2.样本要求是什么?
要求老师提供纯化后的 PCR 产物,片段在250~280 bp。
3.测序平台和测序策略?
CRISPR Screen 的测序平台是 Illumina,测序策略为 PE150。
4.为什么一对引物可以扩增出所有的 sgRNA ?
根据 sgRNA 上下游的通用载体进行引物设计,所以可以扩增出所有转入细胞系中 sgRNA。
CRISPR Screen——高通量基因编辑手段
CRISPR Screen检测:
基于CRISPR/Cas9技术,设计成千上万个sgRNA,在全基因组范围内进行基因编辑实验,筛选出大量突变细胞,识别与特定表型相关 的基因,通过高通量测序技术,统计每一种sgRNA reads富集数,比较每一组sgRNA变化情况,并按照从大到小进行排序,为研究打 靶基因提供有力的武器。检测全面,精准分析,专业背景强。
应用方向
文库筛选
可进行全基因组规模的文库筛选,对某类功能相关的基因编辑的筛选
队列研究
疾病与风险因素、遗传特征等研究。
癌症疾病
肿瘤、免疫病等研究等。探究肿瘤进化机制、寻找肿瘤治疗靶标、高效探索药物机制、开发联合用药等。
动植物研究
性状筛选等。