常见问题
1.为什么选空间转录组测序技术,它能为我们带来什么样的结果?
2.10x Visium FFPE 空间转录组产品可以适用于哪些样本类型?
3.FFPE组织尺寸标准,及尺寸不符的处理办法?
4.样本质检的内容及方法?
10x Visium FFPE 空间转录组测序——无偏检测组织切片基因表达,还原表达基因位置信息
技术路线
切片
质控
染色成像
探针杂交
建库测序
数据分析
探针杂交
针对人(>18000基因)和小鼠(>20000基因)mRNA设计特异性探针,每个探针分为左侧探针(LHS)和右侧探针(RHS)两部分:LHS包含read 2 测序引物结合序列和特异性序列,RHS 包含特异性序列和polyA序列。LHS与RHS的特异性序列与mRNA结合后,连接形成完整的探针序列。再经过透化等过程,将探针释放与玻片的Oligo序列结合和延伸,最终构建成完整的文库。10x Visium 玻片
信息分析
数据经过严格质控,采用10x Visium官方分析流程和自主开发分析流程,将染色图像与表达数据相结合,获取空间位置表达信息,确保数据分析准确性和可靠性。10x Visium FFPE 空间转录组 | 分析内容 |
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数据处理 | |
数据质控 | |
数据比对 | |
表达定量 | |
Space ranger /Seurat 分析 | |
PCA降维 | |
聚类/降维分析 | |
差异表达分析 | |
小提琴图 | |
聚类热图 | |
t-SNE/UMAP展示 | |
空间位置展示 | |
富集分析 | |
Reactome 富集分析 | |
聚类GO 富集分析热图 | |
KEGG 富集分析 | |
高级分析 | |
Spot 定义 | |
轨迹分析 | |
拷贝数分析 | |
WGCNA共表达 | |
肿瘤特征分析 |
应用方向